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免疫熒光方法中的重要環(huán)節(jié):1、冰凍切片制備：建議用新鮮組織，否則組織細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)破壞，易使抗原彌散。選用干凈鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等，防止裂片和脫片嚴(yán)重。2、組織切片固定：切好片風(fēng)干后立即用冰丙酮等固定液進(jìn)行固定5-10min，尤其要較長(zhǎng)時(shí)間保存的白片，一定要及時(shí)固定和適當(dāng)保存。3、血清封閉：為防止內(nèi)源性非特異性蛋白抗原的結(jié)合，需要在一抗孵育前先用血清（與二抗來(lái)源一致）封閉，減弱背景著色。血清封閉的時(shí)間是可以調(diào)整的，一般10-30min。4、一抗孵育條件：在免疫組化反...

免疫熒光標(biāo)記技術(shù)（immunofluorescencetechnique）是將已知的抗體或抗原分子標(biāo)記上熒光素，當(dāng)與其相對(duì)應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)時(shí)，在形成的復(fù)合物上就帶有一定量的熒光素，在熒光顯微鏡下就可以看見發(fā)出熒光的抗原抗體結(jié)合部位，檢測(cè)出抗原或抗體。實(shí)驗(yàn)材料組織樣品試劑、試劑盒PBS抗體儀器、耗材玻片加濕盒實(shí)驗(yàn)步驟1.將濕紙巾鋪于載玻片盒底部做成加濕盒，由冰凍切片儀中取出載有切片的載玻片，放入玻片盒中（每邊放6片），或故濕盒中（載玻片勿相互接觸）。2.待載玻片達(dá)室濕且未干...

一.細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)將液氮或-80℃保存的腫瘤細(xì)胞于37℃水浴，快速溶化，用8.0ml培養(yǎng)基混勻已融化的腫瘤細(xì)胞懸液，于1500轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘。棄上清，再吸取8.0ml培養(yǎng)基質(zhì)混勻細(xì)胞沉淀，再1500轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘，棄上清，細(xì)胞沉淀用1.0ml培養(yǎng)基混勻，備用。另取一個(gè)75cm2方瓶，加入14.0ml培養(yǎng)基質(zhì)，將上述制備的含腫瘤細(xì)胞懸液(1.0ml)加入此方瓶中，于37℃，5%CO2孵育箱中培養(yǎng)。若此腫瘤細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)，大約3－4天細(xì)胞基質(zhì)會(huì)變黃，5.0ml細(xì)胞懸液可傳代...

免疫熒光標(biāo)記技術(shù)（immunofluorescencetechnique）是將已知的抗體或抗原分子標(biāo)記上熒光素，當(dāng)與其相對(duì)應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)時(shí)，在形成的復(fù)合物上就帶有一定量的熒光素，在熒光顯微鏡下就可以看見發(fā)出熒光的抗原抗體結(jié)合部位，檢測(cè)出抗原或抗體。實(shí)驗(yàn)材料懸浮細(xì)胞試劑、試劑盒多聚-L-賴氨酸儀器、耗材離心機(jī)培養(yǎng)箱實(shí)驗(yàn)步驟1.細(xì)胞在冰浴中冷卻，然后用臺(tái)式離心機(jī)于4℃以800g離心5min，吸去培養(yǎng)液并以4℃PBS重懸細(xì)胞。2.離心吸去PBS，以1~2ml2%PFA固定液，...

進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌流是獲得良好的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果以及保存腦、腎、心臟和其他許多器官所必需的。對(duì)于未經(jīng)訓(xùn)練的實(shí)驗(yàn)人員，初次進(jìn)行灌流可能會(huì)失敗，故建議首先用一些對(duì)照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物練習(xí)，以熟悉此過(guò)程?；痉桨笇?shí)驗(yàn)材料小鼠試劑、試劑盒PBS儀器、耗材23-G針頭注射管解剖器械實(shí)驗(yàn)步驟1.一支針管吸滿1×PBS，另一支吸4%PFA固定液（4℃），擱置待用。2.在袋中用CO2氣體處死小鼠。停止吸呼后，立刻背朝下放平小鼠，小心剖開胸腔防止過(guò)多出血，小心并迅速切開肋骨，剪去橫隔膜，暴露心臟。3.小心將吸...

名稱：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的取血關(guān)鍵詞：動(dòng)物,取血,方法目的：規(guī)范實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(家兔、狗，豚鼠)取血的方法和途徑,主體內(nèi)容：（一）家兔1．耳緣靜脈取血法選好耳緣靜脈，拔去被毛，用二甲苯或酒精涂擦局部，小血管夾夾緊耳根部，使血管充血擴(kuò)張。術(shù)者持粗針頭從耳尖部血管，逆回流方向刺入靜脈內(nèi)取血，或用刀片切開靜脈，血液自動(dòng)流出，取血后棉球壓迫止血，取血量2～3ml。壓住側(cè)支靜脈，血液更容易流出；取血前耳緣部涂擦液體石蠟，可防止血液凝固。2．耳中央動(dòng)脈取血法家兔固定箱內(nèi)，用手揉擦耳部，使中央動(dòng)脈擴(kuò)張。左...

實(shí)驗(yàn)方法原理藥物半數(shù)致死量LD50是指藥物急性毒性實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)動(dòng)物死亡率為50%時(shí)的單次給藥劑量，單位通常為mg/kg。例如，當(dāng)某藥物給予400mg劑量時(shí)，可致使一半家兔（體重約為4kg）死亡，則其LD50值為100mg/kg。LD50值通常反映藥物急性毒性的大小。藥物的急性毒性、慢性毒性實(shí)驗(yàn)同屬于一般毒理學(xué)的研究范疇。此外，藥物毒理學(xué)研究尚包括特殊毒理學(xué)（致癌、致畸、致突變）、藥物依賴性及過(guò)敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)等。各種屬動(dòng)物均可用于藥物L(fēng)D50值的測(cè)定，通常使用嚙齒類動(dòng)物（大鼠和小鼠）...